众所周知，成功的实验往往依赖于高质量的样本制备，而对于流式细胞术来说，单细胞悬液的制备是实验顺利进行的关键。为了进行有效的流式分析，必须将组织分散成单个细胞，并保持细胞的基本属性和生物学特性。因此，在流式实验中，如何制备出合格且分散均匀的单细胞悬液，成为了样本制备的核心要点。今天将为大家介绍几种常见的组织样本单细胞悬液制备方法，帮助大家在流式细胞术实验中取得更好的结果。

一、脾脏单细胞悬液制备操作步骤

1.将切除的脾脏组织剪成小块。
2.将碎片放置在连接到50 mL圆锥管的筛网上。
3.使用注射器活塞轻轻挤压脾脏碎片，通过筛网进行细胞分离。
4.用过量的PBS缓冲液冲洗，帮助细胞通过筛网。
5.以1,600 rpm的速度离心细胞悬液5分钟，收集细胞沉淀。
6.小心吸取上清液。
7.将细胞沉淀重新悬浮在2 mL预热至37°C的红细胞裂解液中。
8.在37°C水浴中孵育细胞2分钟。
9.加入至少30 mL的PBS，重复以1,600 rpm离心5分钟。
10.丢弃上清液后，将细胞重新悬浮在PBS中，最终浓度调整为每毫升2 x 10^6个细胞。

二、胸腺单细胞悬液制备操作步骤

（Ⅰ）将胸腺取出并置于无菌PBS溶液中浸泡。
（Ⅱ）将胸腺组织放入200目筛网中，使用组织研磨棒轻轻研磨，直到没有明显的块状物。
（Ⅲ）用15 mL PBS缓冲液冲洗筛网，将冲洗液收集到15 mL离心管中，进行300 g离心5分钟，弃去上清液。
（Ⅳ）用细胞染色缓冲液重悬胸腺细胞并计数，将细胞浓度调整至1×10^7个/mL。

三、脑组织单细胞悬液制备操作步骤

小鼠脑组织单细胞悬液的制备方法有多种，常见的包括酶解消化法、组织解离器法和研磨法。首先，使用含胶原酶Ⅳ和DNase I的消化液，鼠脑分割后与消化液混合，常见的处理方式包括：

（1）酶解消化+摇床：将鼠脑用钝性镊子分割后放入消化液中，放置于37℃摇床震荡2小时。
（2）酶解消化+组织解离器：在消化液中处理鼠脑后，使用组织解离器进行震荡，约2分钟后观察脑组织解离成乳糜状。
（3）Trypsin消化+组织解离器：使用Trypsin消化液处理，结合组织解离器加热至37℃进行缓慢震荡，通常约30分钟。
（4）研磨杵研磨：将鼠脑分割后放入研磨玻璃中，加入消化液，用玻璃研磨棒反复按压直至完全解离，避免产生气泡影响细胞活性。

流式细胞术分析依赖于单细胞水平的精确测量，因此在处理不同组织时，必须选择对细胞损伤最小、产率较高的单细胞悬液制备方法。这能最大限度地保持细胞的原始特性，从而确保实验结果的准确性和可靠性。js33333金沙线路检测依托其先进的单克隆抗体开发平台，提供高亲和力和高特异性的经典克隆细胞株纯化抗体，广泛应用于多种免疫细胞亚群的检测，包括但不限于Th细胞。这些抗体涵盖人类、大鼠、小鼠等多个物种，提供丰富的检测指标选择。此外，js33333金沙线路检测还为客户提供免费的颜色搭配建议、实验操作指导及数据分析服务，致力于为客户提供全面的流式细胞术解决方案。

以下是推荐的流式抗体配方方案，用于检测不同免疫细胞亚群