流式细胞分析中，样本质量对最终检测结果至关重要。在免疫学和血液学领域，常用的样本包括外周血、骨髓、各类体液（如脑脊液、胸水、腹水）以及组织（如淋巴结、脾脏和肝脏）。由于不同样本需要不同的处理方法，因此，样本的制备和保存对于获取准确的检测结果尤为重要。本文将详细介绍各种样本的处理方法。

1.外周血/骨髓

样本保存：收集样本后，应将其置于含有抗凝剂（通常为肝素或EDTA）的试管中，并在室温下保存，尽量在12小时内进行处理。如果无法及时处理，建议在4℃下保存，此时最好使用肝素抗凝管。

样本制备：一般来说，制备单细胞悬液不需要特别的处理，通常使用淋巴细胞分离液和红细胞裂解液。然而，在临床检测中，为了避免细胞成分的损失，通常不推荐使用淋巴细胞分离液来分离单核细胞。

抗凝剂的选择：血液标本可以使用EDTA、ACD（枸橼酸葡萄糖）或肝素作为抗凝剂。使用ACD和肝素抗凝的样本在72小时内细胞稳定，而使用EDTA抗凝的样本在48小时内细胞稳定。

对于骨髓样本，优先选择肝素作为抗凝剂。

2.胸水、腹水、脑脊液样本

样本保存：收集样本后，应将其置于肝素抗凝管中，并在室温下保存，尽量在12小时内进行处理。如果无法及时处理，则应在4℃下保存，且时间最好不超过48小时。

样本制备：将样本以1000-1500 rpm离心5分钟，弃去上清；接着加入含有0.1%牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液（PBS），进行5分钟的离心洗涤；最后，加入适量PBS进行重悬。如有细小沉淀，可用300目尼龙网过滤后备用。

应用：常用于检测炎症、感染、肿瘤等病理状态。适用于免疫系统疾病的表型分析；形态学染色分析。

3.组织（如淋巴结、脾、肝等）

样本保存：切取新鲜组织样本后，应置于生理盐水或PBS中，在室温下保存，尽量在12小时内处理。如果无法及时处理，则应在4℃下保存，且保存时间最好不超过48小时。不建议使用甲醛或乙醇固定细胞，也不应使用酶或表面活性剂处理细胞。

样本制备：常用的组织样本制备单细胞悬液的方法包括机械法、酶处理法、化学试剂处理法和表面活性剂处理法。在流式细胞分析中，为了保持抗原活性，通常采用机械法进行样本处理。在使用机械法时，需要注意动作轻柔，以尽量减少对细胞的损伤。

4.体外培养的细胞系

样本保存：没有固定的样本立即检测，应在室温下于3小时内处理。固定后，使用TUNEL流式固定液室温固定60分钟，离心洗涤后，再用90% FBS和10% DMSO冻存，可稳定保存2个月。若使用70%冰乙醇进行固定，可在-20℃下保存1周。

样本处理：悬浮细胞可直接收集；贴壁细胞则需经过酶消化后再进行收集。

综上所述，针对不同的细胞和组织，依据实验内容的不同，会有相应的处理方案和保存方法。因此，需要根据具体问题和实验需求制定最优化的样本处理方案。

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