实验虽然结束,但最重要的工作还是如何把 OD 值转化为浓度,以达到分析数据的目的。
通常,推荐使用专门的曲线拟合工具绘制 ELISA 标准曲线 curve Exert1.4
点击可以直接下载 curve Exert1.4 软件 戳↓↓↓
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1.启动「Curve Expert1.4」。
2.X 轴输入所对应的浓度值,Y 轴输入标准品的 OD 值。如图↓
3.单击 [运行] 按钮,出现如下对话框。
4.单击 [ok] 按钮,出现如下两个对话框,关闭下面一个对话框。
5. 在对话框的右上角出现一些曲线的名称,从「1」开始依次点击曲线名称,在右下角会出现相应拟合的曲线。
6. 根据拟合的曲线选取 ELISA 拟合度最佳的曲线双击,出现如下对话框。
注意:选择系数(即「r」值)最佳的曲线方程来进行运算。在上面的对话框右上角有「r」值 ,当「r」值越接近 1,拟合度越好。
7.按 [Ctrl] 键+[L] 键或者右键单击选择 [analyze],出现如下对话框。
8. Y 轴输入对应的样本 OD 值,单击 [Calculate] 按忸,即可得到待测蛋白的实际含量。
9. 如果出现 , 可以调节相应的 值,即根据预测的 X 结果,选择附近的数值即可。
10. 如想得到 ELISA 拟合曲线的方程,可在步骤 6 的对话框空白处右击,选择「Information」,得到如下对话框:点击「Copy」。
11. 在你需要的位置粘贴即可得到如下数据:
MMF Model:y =(a*b+c*x^d)/(b+x^d)
Coefficient Data:
a = 5.02803575349E- 002
b = 3.54849086120E+ 002
c = 2.67845070065E+ 000
d = 1.19812203348E+ 000