自然杀伤细胞（Natural Killer cells, NK细胞）是淋巴细胞的一种，属于机体免疫系统的重要组成部分。NK细胞是一种大颗粒淋巴细胞，与T细胞和B细胞并列为第三大类淋巴细胞，约占血液中所有免疫细胞的15%。它们主要分布在血液、肝脏和脾脏中，是天然免疫系统的核心成员。NK细胞的独特之处在于其无需预先接触抗原就能识别并杀死靶细胞，且不受主要组织相容性复合体（MHC）的限制。这种特性使得NK细胞能够在免疫应答的早期阶段迅速发挥作用，对病毒感染的细胞和肿瘤细胞进行快速清除。因此，NK细胞在机体的先天免疫防御中扮演着至关重要的角色。

一、NK细胞的发育

目前主流的NK细胞发育模型认为，自然杀伤细胞（NK细胞）起源于骨髓中的CD34+CD45RA+造血祖细胞（HPCs）。在骨髓中，这些HPCs通过共同淋巴样祖细胞（CLPs）和NK细胞前体（NKPs）逐步发展成为成熟的NK细胞。随后，这些成熟的NK细胞会迁移到外周血，形成常规NK细胞（cNK细胞），或者定居在特定组织中，成为组织驻留NK细胞（trNK细胞）。

trNK细胞的分化发生在多个组织部位，包括肺、胸腺、肝脏、子宫、皮肤、皮下脂肪组织和肾脏。在不同组织中，NK细胞展现出不同的表型特征和功能特性，形成了NK细胞在不同成熟阶段的多样化。即使在同一器官或同一组织内，NK细胞也表现出高度的异质性，这意味着它们能够适应各种微环境并执行多种免疫功能。这种多样性和异质性使得NK细胞能够在机体的不同部位发挥其独特的免疫保护作用。

二、NK细胞的分类

NK细胞通常被定义为CD3-、CD56+的细胞。根据表面蛋白CD56和CD16的表达情况，NK细胞可以分为两类：

①：CD56高表达（CD56hi）且CD16低表达或不表达（CD16-）：这类NK细胞主要负责免疫调节和细胞因子的产生。它们在全部NK细胞中约占10%。

②：CD56低表达（CD56low）且CD16高表达（CD16+）：这类NK细胞具有较强的细胞毒性作用，能够直接杀伤靶细胞。它们在全部NK细胞中占约90%。

这种分类反映了NK细胞在功能上的多样性，其中CD56lowCD16+亚群主要执行细胞毒性功能，而CD56hiCD16-亚群则更多参与免疫调节和细胞因子的分泌。

三、NK细胞检测指标选择

NK细胞的鉴定通常依赖于特定的表面标志物：

Human：CD3-CD56+CD16 +/-
CD3-：排除T细胞，特别是NKT细胞（CD3+CD56+）。
CD56+：NK细胞的标志性表面蛋白。
CD16 +/-：部分NK细胞表达FcγRIIIA（CD16），这是识别抗体结合靶细胞的重要受体。

根据CD56和CD16的表达水平，人NK细胞可以进一步分为两个主要亚群：

①CD3-CD56dimCD16bri：
高细胞毒活性：这个亚群占外周血NK细胞的大部分（约90%），具有强大的细胞毒性功能，能够直接杀伤靶细胞。
特征：CD56低表达（dim），CD16高表达（bri）。

②CD3-CD56briCD16dim：
分泌细胞因子：这个亚群占比较小（约10%），主要负责产生各种细胞因子，参与免疫调节。
特征：CD56高表达（bri），CD16低表达或不表达（dim）。

Mouse：CD3e-CD49b+NK1.1+NKP46+
CD3e-：排除T细胞。
CD49b+：也称为DX5，是NK细胞的一个常见标志。
NK1.1+：这是NK细胞的另一个重要标志，在NK细胞发育的早期阶段就开始表达。
NKP46+：即自然细胞毒性受体1（NCR1），也是NK细胞的一个特异性标志。

常规NK细胞检测时，通常使用CD49b+，NK1.1+，NKP46+等阳性指标来判断NK细胞群的比例。其中，NK1.1在NK细胞发育的最早期就开始表达，因此使用NK1.1作为标志物可以更全面地检测到不同发育阶段的NK细胞。选择这三个标志物中的任何一个都可以有效识别和定量NK细胞群。

小鼠NK细胞可以根据其发育和功能差异分为不同的亚群，这些亚群可以通过表面标志物CD11b和CD27的表达水平来区分：

CD11blowCD27low：这是NK细胞发育的最早阶段。
CD11blowCD27high：代表未成熟的NK细胞亚群。
CD11bhighCD27high：这一亚群主要负责分泌细胞因子。
CD11bhighCD27low：这是具有高细胞毒活性的成熟NK细胞亚群。

四、常用NK细胞功能检测指标

1.活化水平

CD107a：CD107a（LAMP-1）的表面表达是NK细胞脱颗粒和活化的标志。当NK细胞被激活时，CD107a会出现在细胞表面，因此可以通过流式细胞术检测其表达来评估NK细胞的活化状态。

2.自然杀伤

1）脱颗粒途径：

Granzyme B：一种丝氨酸蛋白酶，与穿孔素一起进入靶细胞，诱导靶细胞凋亡。
Perforin：形成孔道，使Granzyme B等分子进入靶细胞，导致细胞裂解和凋亡。

2）凋亡诱导配体途径：

Fas/FasL：Fas配体（FasL）结合到靶细胞上的Fas受体，触发凋亡信号。
TRAIL/DR4 DR5：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）通过与其受体DR4和DR5结合，诱导靶细胞凋亡。
TNF/TNFR：肿瘤坏死因子（TNF）与其受体（TNFR）结合，也可以诱导细胞凋亡。

3.细胞因子合成和分泌

IFN-g，GM-CSF等，活化Mf,诱导Th0®Th1,Ig类别转换;IL-10,TGFβ等导致免疫耐受。

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免疫细胞亚群的流式配方方案

流式抗体推荐
种属	细胞群	流式抗体搭配	货号
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		CD3-FITC	FITC-30004
		CD16-PE	PE-30061
		CD56-PE	PE-30008
		CD19-APC	APC-30066
Human	Th1/Th2 细胞群检测	CD3-PerCP/Cyanine5.5	PCP55-30004
		CD4-FITC	FITC-30005
		IFN-γ-PE	PE-30053
		IL4-APC	APC-30043
Mouse	Th1/Th2 细胞群检测	CD3-PerCP/Cyanine5.5	PCP55-30002
		CD4-FITC	FITC-30001
		IFN-γ-PE	PE-30074
		IL4-APC	APC-30026
Human	Treg细胞群检测	CD4-FITC	FITC-30005
		CD25-PE	PE-30035
		CD127-APC	APC-30033
Mouse	Treg细胞群检测	CD4-FITC	FITC-30001
		CD25-PE	PE-30017
		FOXP3-APC	APC-30055